Percoll細(xì)胞分離液，適合分離細(xì)胞，亞細(xì)胞成分和大病毒(>70S)，滲透壓均勻，粘度低，可調(diào)至生理離子強(qiáng)度和pH，分離條件溫和，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，可以滅菌消毒。
1 作用原理
Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，可形成高達(dá)1.3g／ml密度，采用預(yù)先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200～1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外，Percoll不穿透生物膜，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害，因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒，還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。
2 分離液的配置
將1份10XPBS與9份Percoll貯存液混合，制成等滲Percoll懸液，此懸液被認(rèn)為是100%Percoll懸液，其密度為1.1294g/ml。用PBS或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋100%Percoll而獲得所需密度的Percoll分離液用于相應(yīng)細(xì)胞的分離。若分離淋巴細(xì)胞應(yīng)使用1.0777g/ml，配制時(shí)用稀釋液稀釋60%即可。
取比重1.077的Percoll分離液X ml與離心管中，將等倍稀釋的抗凝血1/2 X ml 小心疊加在分離液上，經(jīng)水平離心（1500rpm）后，便得四個(gè)細(xì)胞層，從而分離出淋巴細(xì)胞。表層為死細(xì)胞殘片和血小板，底層為粒細(xì)胞和紅細(xì)胞，中間有兩層，上層富含單核細(xì)胞，下層富含淋巴細(xì)胞。
3 分離液的優(yōu)點(diǎn)
該法是純化淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的一種較好的方法，淋巴細(xì)胞純度高達(dá)98%，單核細(xì)胞純度可達(dá)78%。
因?yàn)镻ercoll具有滲透性低、不穿透細(xì)胞、粘度低、密度高和無(wú)毒害等優(yōu)點(diǎn)，與目前常用的密度梯度離心介質(zhì)，包括蔗糖（Sucrose）、血清白蛋白（Serum albumin, ALB）、聚蔗糖（Ficoll）、氯化銫（CsCl）等相比，是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動(dòng)物細(xì)胞及其細(xì)胞器的分離，純化了包括人血液細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、紅血球細(xì)胞、白血球細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞等在內(nèi)的十余種動(dòng)物細(xì)胞。這一技術(shù)也開(kāi)始用于用于分離和純化植物原生質(zhì)體、核、葉綠體和線粒體。
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